Oбразование микробной плёнки
Для изучения образования микробной плёнки in vivo исследуемые носили в течение 5 дней шины с закреплёнными на них пластинками из 6 различных реставрационных материалов. После 5 дней была проведена прижизненная окраска и проведена оценка содержания микрофлоры в составе налёта при помощи лазерной сканирующей микроскопии. Помимо этого были изучены такие параметры как толщина плёнки (мкм) и площадь, покрытая налётом.
Данное исследовавание важно в изучении вторичного кариеса, который, как известно поражает ткани зуба вокруг уже существующих реставраций, поэтому изучение влияния пломбировочного материала на микрофлору в полости рта является очень важным. Данное исследование было проведено с использованием сканирующей лазерной микроскопии, так как изучение плёнки в отдельности от поверхности является технически трудной задачей вследствие повреждения плёнки. Этот метод позволяет детально визуализировать микробиологические образцы в тех случаях, когда применение фазово-контрастной или флуоресцентной микроскопии ограничено.
В данном исследовании ставилось основной задачей оценить скопление мертвых и живых микроорганизмов, а также толщину биоплёнки на 6 различных материалах.
В исследовании участвовало 3 студента факультета стоматологии (возраст 26-30 лет) с высоким уровнем гигиены полости рта. По индексу зубного налёта эти студенты были отнесены к группе, в которой налёт образуется медленно. Ни у одного из участников не было зарегистрировано признаков кариеса или деструктивного периодонтита, помимо этого ни один из них не подвергался лечению антибиотиками в течение последних 6 месяцев. Каждый из участников перед началом исследования прошёл профессиональную профилактику, включая чистку зубов.
Каждый из участников должен был носить индивидуально сделанную акриловую шину для верхней челюсти в течение 5 дней. Так как участники были отнесены к группе с медленным образованием налёта, этот срок был выбран оптимальным для его получения. Материалы, предназначенные для изучения были приготовлены в стандартном варианте (5 мм. в диаметре, толщиной в 1.5 мм). Были исследованы следующие материалы: амальгама (Vivacap; Vivadent Dental, Elllwangen, Germany), золото ( Degulor M; Degussa ?
Для сбора плёнки in vivo, пластинки были помещены с щёчной стороны шин, таким образом чтобы плёнка образовывалась беспрепятственно, а во время приёмов пищи и при чистке зубов пластинки хранились в тёплой воде 370С. После 5 дней пластинки были изъяты, промыты тёплым физиологическим раствором. После этого плёнку подвергли прижизненной окраске при помощи флюоресцина диацетата и этидия бромида для визуализации процента живых (зелёный цвет) и мёртвых бактерий (красный цвет). Живые клетки перерабатывают краситель до флюоресцина, который даёт зелёное свечение, адсорбируясь на поверхностной мембране. Мёртвые клетки не могут метаболизировать флюоресцина диацетат, а этидия бромид связывается с ядрами мёртвых клеток, давая красное свечение.
После этого окрашивания образцы были повторно промыты, просушены -2 мин. при температуре 370С и помещены в фиксатор, содержащий толуин/паралоид, для улучшения качества снимков. После этого был проведён анализ плёнок при помощи лазерной сканирующей микроскопии.
Оптические участки в 1мкм из центральной части каждого из образцов были изучены. Для изучения цвета была применена программа (FLUORO), оценивающая процентное содержание зелёного и красного цветов. Толщину плёнки определяли посредством счёта секций в которых были видны бактерии.
Результаты
Жизнеспособность микроорганизмов в образцах : амальгама, золото, компомер, стеклоиономер оказалась нулевой или отмечалась, но на низком уровне. Для композита этот показатель варьировал от 4 до 21%. На керамике этот показатель оказался наибольшим (34-86%).
Толщина плёнки варьировала от1мкм на композите и до 17 мкм на амальгаме. То же самое отмечалось по отношению к площади покрытой поверхности - почти 100% - на амальгаме и только 6% на стеклоиономере. Помимо этого рассматривалось соотношение покрытия поверхности образца и жизнеспособности микроорганизмов: металлические образцы и компомер показали наибольшие показатели покрытия поверхности с наименьшим уровнем жизнеспособности микроорганизмов, в то время как композит и особенно керамика показали наименьшее поверхностное покрытие с наивысшей жизнеспособностью микроорганизмов.
Материалы, связанные с результатами
Все тестированные материалы аккумулируют на поверхности первично мёртвую флору. В то время, как хорошо известно, что амальгама выделяет ионы, которые убивают бактерии в налёте, информация касательно золота и его сплавов относительно редка. Однако некоторые публикации показывают, что даже на поверхности, которая не соприкасалась с золотом, бактерии были мертвы или повреждены. С другой стороны известно, что стеклоиономеры выделяют фтор-ионы, которые могут повлиять на рост или жизнеспособность бактерий полости рта. Исключения касательно жизнеспособности прикрепляющейся микрофлоры выявлены в образцах керамики и композита. В то время, как бактериальная плёнка на композите выявила жизнеспособность от 4 до 21% , на образце керамики этот показатель достигает 34-86%, что превосходит даже показатели для эмали. Данных по жизнеспособности микрофлоры на керамической поверхности не так много.
Лишь в нескольких ранее проведённых исследованиях измерялась поверхность, покрытая микробной плёнкой. На винирах изготовленных из композита плёнка покрывала 35% поверхности уже через 4 дня, в то время как на металлических поверхностях было покрыто 40% площади. В данном исследовании металлические поверхности и компомер обнаружили высокий процент поверхностного покрытия налётом, в то время как композит, стеклоиономер и керамика показали сильные различия (см. табл.)Можно было ожидать, что на поверхностях, которые более всего покрываются налётом, будет и большее число живых бактерий. Однако композит и керамика показали тенденцию к уменьшенному покрытию поверхности и при этом выявлена повышенная жизнестойкость. Другое соотношение было отмечено между покрытием поверхности и толщиной плёнки. Независимо от площади покрытия толщина плёнки была достаточно небольшой (менее 10мкм). Особенно это видно у керамики, которая выявила небольшое покрытие площади и небольшую толщину.
При сравнении толщины плёнки с жизнеспособностью было выявлено, что даже при совершенно мёртвых бактериях на металлических поверхностях, плёнка достигала 17 мкм. В противоположность этому плёнка, содержащая живые микроорганизмы достигала толщины 5 мкм.
В получении данных результатов могли сыграть свою роль :
1) физические параметры, как поверхностная шероховатость материала
2) преимущественное притяжение поверхностью мёртвых микроорганизмов
3) смерть микроорганизмов после прикрепления, или реальная бактерицидность реставрационных материалов.
Источник: STOMATOLOG.MD